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　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得

　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　供试品溶液的制备取益母草颗粒，混匀，研细，取约0.7g，精细称定，置100ml 烧杯中，加热水15ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好的强酸性阳 离子交流树脂柱(内径1.5cm，柱高5cm)，用水200ml洗脱，弃去水液，再用甲醇 -氨水(70∶30)100ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移至10ml 量瓶中，加活动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　供试品溶液的制备取益母草颗粒，研匀，取0.8g，精细称定，置100ml烧杯 中，加热水20ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好的强酸性阳离子 交流树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水200ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水 (70∶30)200ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移至10ml量 瓶中，加活动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　色谱前提与体系合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (2∶98)为活动相；流速为每分钟0.2ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：95 ℃，氛围流速：1.9L/min)。

　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　比较品溶液的制备取105℃枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，精细称定， 加活动相制成每1ml别离含0.05mg、0.1mg的溶液，即得。

　　比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，精细 称定，加活动相制成每1ml别离含0.05mg、0.15mg的溶液，即得。

　　40、中， 加热水20ml使消融， 用稀盐酸调pH值至13， 经由过程已处置好的强酸性阳离子交流树脂 柱 ( 内径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 100ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)150ml 洗 脱， 搜集洗脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加活动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即得。 0093 测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 0094 施行例 8 益母草口服液含量测定办法 0095 色谱前提与体系合用。

　　31、 1 3， 经由过程已处置好的强酸性阳离子交流树脂柱 ( 内 径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 200ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)200ml 洗脱， 搜集 洗脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加活动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤 膜 (0.45m) 滤过， 即得。 0068 测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 0069 施行例 3 益母草片含量测定办法 0070 色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈。

　　比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，精细 称定，加活动相制成每1ml别离含0.1mg、0.2mg的溶液，即得。

　　供试品溶液的制备取益母草流浸膏，混匀，取5g，精细称定，置100ml烧杯 中，加热水50ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好的强酸性阳离子 交流树脂柱(内径2cm，柱高10cm)，用水400ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水 (70∶30)400ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移至10ml量 瓶中，加活动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以甲醇-水 (3∶97)为活动相；流速为每分钟0.8ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：120 ℃，氛围流速：3L/min)。

　　38、， 即得。 0087 供试品溶液的制备取益母草膏， 混匀， 取 1.5g， 精细称定， 置 100ml 烧杯中， 加热水 30ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3， 经由过程已处置好的强酸性阳离子交流树脂柱 ( 内径 1.5cm， 柱高 6cm)， 用水 150ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)100ml 洗脱， 搜集 洗脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加活动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤 膜 (0.45m) 滤过， 即得。 0088 测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪。

　　30、谱前提与体系合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (6 94) 为活动相 ； 流速为每分钟 0.5ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 90， 空 气流速 ： 2.8L/min)。 说 明 书 CN 101474249 B6/8 页 8 0066 比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 精细称 定， 加活动相制成每 1ml 别离含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得。 0067 供试品溶液的制备取益母草颗粒， 研匀， 取 0.8g， 精细称定， 置 100ml 烧杯中， 加热 水 20ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至。

　　关于益母草的质量掌握办法，在现有手艺中也公然许多，中国药典2005年版一 部中的益母草及益母草膏尺度均接纳薄层扫描法测定盐酸水苏碱的含量，但该办法 操纵啰嗦、检测活络度低、反复性欠好，偏差较大；有报导接纳高效液相色谱法测 定药材或制剂中盐酸水苏碱的含量，接纳了磺酸基键合硅胶柱、阳离子交流树脂柱、 氨基键合硅胶柱等色谱柱及紫外检测的办法法停止测定，这些办法中所利用的柱子 不变性较差，紫外波长挑选结尾吸取作为测定波长，乐音大，滋扰较严峻，从而使 全部办法重现性欠好。本创造打破原有文献公然的质量掌握办法，含量测定办法依 据实验成果表白其精细度、不变性、重现性优良，可以更有用地掌握益母草及其制 剂的产物格量。

　　8、薄层扫描法测定盐酸水苏碱的含量， 但该办法操纵烦 琐、 检测活络度低、 反复性欠好， 偏差较大 ； 有报导接纳高效液相色谱法测定药材或制剂中 盐酸水苏碱的含量， 接纳了磺酸基键合硅胶柱、 阳离子交流树脂柱、 氨基键合硅胶柱等色谱 柱及紫外检测的办法法停止测定， 这些办法中所利用的柱子不变性较差， 紫外波长挑选末 端吸取作为测定波长， 乐音大， 滋扰较严峻， 从而使全部办法重现性欠好。本创造打破原有 文献公然的质量掌握办法， 含量测定办法根据实验成果表白其精细度、 不变性、 重现性良 好， 可以更有用地掌握益母草及其制剂的产物格量。 创造内容 0004 本创造目标在于供给一种益母草含量测定办法。。

　　测定法别离汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注 入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　比较品溶液的制备取枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，精细称定，加流 动相制成每1ml别离含0.05mg、0.15mg的溶液，即得。

　　别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液10μl，注入液相 色谱仪。此前提下盐酸水苏碱与别的组分到达基线，实际塔板 数按盐酸水苏碱计较大于10000，盐酸水苏碱保存工夫约为10分钟，见表1。

　　15、最初用水洗至流出液呈中性。 0023 本创造与公然的办法停止了比照 ： 比照办法 1) 用高效液相色谱法测定益母草颗 粒中的盐酸水苏碱含量， 接纳氨基柱或磺基柱、 紫外检测器检测， 选用的波长为紫外结尾吸 收， 基线不不变， 滋扰严峻， 且氨基柱或磺基柱易水解， 使柱效低落， 影响别离结果， 见附图 1 ； 比照办法 2) 用氨基柱、 蒸发光散射检测器对盐酸水苏碱含量停止测定， 但氨基柱易水 解， 招致尝试过程当中基线。本创造的办法选用不变性好的十八烷基硅烷 键合硅胶反相色谱柱， 接纳 HPLC-ELSD 法对益母草及其制剂中的盐酸水苏碱停止含量测定 研讨， 成果基线、 别离度好， 见附图 3。办法学考证表白， 该法别离结果优良， 办法线性、 不变性、 反复性、 加样收受接管率等办法学考查均契合定量测定的请求。 附图阐明 0024 附图 1 氨基柱， 紫外检测器测定图谱 说 明 书 CN 101474249 B3/8 页 5 0025 附图 2 氨基柱， 蒸发光散射检测器测定图谱 0026 附图 3 十八烷基硅烷键合硅胶柱， 蒸发光散射检测器测定图谱 0027 上面施行例用于进一步阐明本创造的手艺计划和手艺结果。 0028 施行例 1 ： 益母草药材含量测定 0029 仪器 ： 日本岛津 LC-10Atvp 高效液相色谱仪， 威玛龙色谱事情站 ； 美国奥泰 EL。

　　本创造目标在于供给一种益母草含量测定办法。本创造另外一目标在于供给一种 益母草制剂含量测定办法。

　　活动相的流速为每分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测的漂移管温度：60-130 ℃，氛围流速：1.5-3.2L/min。

　　供试品溶液的制备取益母草滴丸内容物，混匀，取0.5g，精细称定，置100ml 烧杯中，加热水20ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好的强酸性阳 离子交流树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脱，弃去水液，再用甲醇- 氨水(70∶30)150ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移至10ml 量瓶中，加活动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　实验前提色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱Agilent ZORBAX SB-Aq 5μm 4.6×250mm色谱柱；活动相：乙腈-水(5∶95)综合锻炼健身器，流速：0.3ml/min；漂移管温度： 75℃，氛围流速：2.2L/min；柱温：室温。

　　39、， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 0089 施行例 7 益母草滴丸含量测定办法 0090 色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以甲醇 - 水 (4 96) 为活动相 ； 流速为每分钟 0.8ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 110， 空 气流速 ： 2.9L/min)。 0091 比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 精细称 定， 加活动相制成每 1ml 别离含 0.04mg、 0.08mg 的溶液， 即得。 0092 供试品溶液的制备取益母草滴丸内容物， 混匀， 取 0.5g， 精细称定， 置 100ml 烧杯 。

　　别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液及不含益母草的 阳性样品溶液各20μl，注入液相色谱仪。此前提下盐酸水苏碱与别的组分到达基线，实际塔板数按盐酸水苏碱计较大于10000，盐酸水苏碱保存时 间约为10分钟，见表2。阳性样品溶液在色谱在响应地位无吸取峰，可见阳性无干 扰。

　　23、阳离子交流 树脂 ( 国药团体化学试剂有限公司 )。 0043 样品 ： 益母草颗粒(批号 ： 1508001)及缺益母草药材的阳性对还是品， 广西灵峰药 业有限公司。 0044 比较品溶液的制备精细称取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品 10.01mg， 置 10ml 量瓶中， 加活动相使消融并稀释至刻度， 摇匀 (1.001mg/ml) ； 精细量取 0.5ml、 1.5ml 别离置 10ml 量瓶， 加活动相至刻度， 摇匀， 即得 (50.05g/ml、 150.15g/ ml)。 0045 供试品溶液的制备取益母草颗粒， 混匀， 研细， 取约 0.7g， 精细称定， 置 100ml。

　　28、品， 之外标两点法对 数方程计较样品中盐酸水苏碱的含量， 成果见表 3。 0055 表 3 样品测定成果 0056 0057 阐明本创造的办法合适于各类益母草制剂的含量测定。 0058 详细施行例以下 ： 0059 施行例 1 益母草药材含量测定办法 0060 色谱前提与体系合用性实验 ： 以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (4 96) 为活动相 ； 流速为每分钟 0.4ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 80， 空 气流速 ： 2.4L/min)。 0061 比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 加活动相 制成每 1ml 别离含 0。

　　18、) ； 精细量取 0.6ml、 2ml 别离置 25ml 量瓶， 加活动相至刻度， 摇匀， 即得 (47.64g/ml、 158.8g/ml)。 0033 供试品溶液的制备取益母草粉末 ( 过三号筛 ) 约 0.5g， 精细称定， 置具塞锥形瓶 中， 精细参加乙醇 50ml， 密塞， 称定重量， 加热回流 1.5 小时， 放冷， 再称定重量， 加乙醇补足 减失的重量， 摇匀， 滤过。精细量取续滤液 20ml， 水浴蒸干， 残渣加活动相使消融， 转移至 10ml 量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即得。 0034 实验前提色谱柱 ： 十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱 Ag。

　　41、性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以甲醇 - 水 (6 94) 为活动相 ； 流速为每分钟 0.3ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 95， 空 气流速 ： 2.6L/min)。 说 明 书 CN 101474249 B8/8 页 10 0096 比较品溶液的制备取 105枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 精细称定， 加流 动相制成每 1ml 别离含 0.7mg、 0.14mg 的溶液， 即得。 0097 供试品溶液的制备取益母草口服液， 混匀， 精细量取 2ml， 置 100ml 烧杯中， 加热水 15ml稀释， 用稀盐酸调pH值至13， 经由过程已处置好的强酸性阳离子。

　　色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以甲醇-水 (4∶96)为活动相；流速为每分钟0.8ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：110 ℃，氛围流速：2.9L/min)。

　　考查了甲醇-水和乙腈-水等差别的活动比拟例及差别的活动相流速，成果活动 相为乙腈-水(1-10∶99-90)或甲醇-水(2-12∶98-88)，流速为每1分钟0.1ml至1ml， 盐酸水苏碱均能别离；以活动相为乙腈-水(2-8∶98-92)或甲醇-水(4-8∶96-92)， 流速为每1分钟0.2ml至0.8ml，结果更优。

　　比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，加流 动相制成每1ml别离含0.05mg、0.2mg的溶液，即得。

　　36、枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 精细称 定， 加活动相制成每 1ml 别离含 0.08mg、 0.16mg 的溶液， 即得。 0082 供试品溶液的制备取益母草流浸膏， 混匀， 取 5g， 精细称定， 置 100ml 烧杯中， 加热 水 50ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3， 经由过程已处置好的强酸性阳离子交流树脂柱 ( 内 径 2cm， 柱高 10cm)， 用水 400ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)400ml 洗脱， 收 集洗脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加活动相至刻度， 摇匀， 用微孔 滤膜 (0.45m) 滤。

　　测定法别离汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注 入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　色谱前提与体系合用性实验：以十八烷基或辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以 1-10∶99-90的乙腈-水或2-12∶98-88的甲醇-水为活动相；蒸发光散射检测器检测。

　　高效液相色谱-蒸发光散射测定法包罗色谱前提与体系合用性实验，比较品溶液 的制备，供试品溶液的制备和盐酸水苏碱的含量测定步调。

　　试药：盐酸水苏碱化学比较品(含量测定用，批号：11，中国药品 生物成品检定所)，纯度经查抄契合含量测定用化学比较品的手艺请求，含量为 99.07％；甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，水(便宜双蒸水)，氨水(阐发纯)，732 型强酸性阳离子交流树脂(国药团体化学试剂有限公司)。

　　21、次， 盐酸水苏碱峰面积的相对尺度偏向为 0.52， 表白精 密度较好。不变性实验 ： 比较品溶液计较相对尺度偏向， 均匀值为 899675， RSD 为 1.69， 表白比较品溶液在 71h 内不变性较好 ； 供试品溶液计较相对尺度偏向， 日内差均匀值为 260766， RSD 为 1.18， 白天差均匀值为 2590279， RSD 为 1.22， 表白供试品溶液在 95h 内 说 明 书 CN 101474249 B4/8 页 6 不变性较好。反复性实验 ： 计较盐酸水苏碱的含量均匀值为 0.978， 相对尺度偏向 RSD 为 1.56， 表白办法反复性较好。加样收受接管率实验 ： 均匀收受接管率。

　　供试品溶液的制备取益母草粉末1g，置具塞锥形瓶中，参加乙醇50ml，密塞， 称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀， 滤过。量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加活动相使消融，转移至10ml量瓶并稀 释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得亚美体育登录。

　　7、益母草及其制剂的质量掌握办法， 出格触及益母草及其制剂的含量测 定办法。 布景手艺 0002 益母草， 别号茺蔚、 坤草， 是一种草本动物。性微寒， 味苦辛， 可去瘀生新， 活血调 经， 利尿消肿， 是历代医家用来医治妇科病之要药。当代医学研讨证实， 益母草含益母草 碱、 盐酸水苏碱、 益母草定、 益母草宁等多种生物碱及苯甲酸、 氯化钾等。 据当代临床及植物 施行证实， 益母草浸膏及煎剂对子宫有强而耐久的镇静感化， 不单能加强其膨胀力， 同时能 进步其慌张度和膨胀率。 0003 关于益母草的质量掌握办法， 在现有手艺中也公然许多， 中国药典 2005 年版一部 中的益母草及益母草膏尺度均接纳。

　　35、加活动相至刻度， 摇 匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即得。 0078 测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 0079 施行例 5 益母草流浸膏含量测定办法 0080 色谱前提与体系合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (7 93) 为活动相 ； 流速为每分钟 0.2ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 90， 空 气流速 ： 2.8L/min)。 说 明 书 CN 101474249 B7/8 页 9 0081 比较品溶液的制备取五氧化二磷。

　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　制剂的取样量为：益母草颗粒取0.1-2g，益母草片及胶囊取0.05-0.5g，益母草 流浸膏取2-10g，益母草膏取0.2-1.5g，益母草口服液量取0.5-5ml，益母草打针液量 取0.1-1ml，其他益母草制剂取样量按含益母草生药量0.1-4g而定取样量。

　　1.一种益母草及含益母草制剂的含量测定办法，其特性在于，含量测定的步调包罗以下：益母草的含量测定办法：色谱前提与体系合用性实验：以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以2-12∶98-88的甲醇-水为活动相；流速为每分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测，漂移管温度：60-130℃，氛围流速：1.5-3.2L/min；比较品溶液的制备 取枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，加活动相制成每1ml别离含0.05mg、0.15mg的溶液，即得；供试品溶液的制备 取益母草粉末0.2-1g，置具塞锥形瓶中，参加乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流0.5-3小时综合锻炼健身器，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀亚美体育登录，滤过；量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加活动相使消融，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过亚美体育登录，即得；测定法 别离汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得；益母草制剂的含量测定办法：色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以2-12∶98-88的甲醇-水为活动相；流速为每分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测，漂移管温度：60-130℃，氛围流速：1.5-3.2L/min；比较品溶液的制备 取枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，精细称定，加活动相制成每1ml别离含0.05mg、0.15mg的溶液，即得；供试品溶液的制备 取益母草制剂内容物，研细，混匀，精细称取或量取适当，置100ml烧杯中，加热水10-50ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好内径1～2cm，柱高5～10cm的强酸性阳离子交流树脂柱，用水50～400ml洗脱，弃去水液，再用70∶30的甲醇-氨水50～400ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移至10ml量瓶中，加活动相至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法 别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，加流 动相制成每1ml别离含0.05mg、0.2mg的溶液，即得。

　　14、现有的制 备办法制成的制剂， 包罗片剂， 胶囊剂， 颗粒剂， 滴丸剂， 口服液， 煎膏剂、 口含片、 丸剂、 散 剂、 栓剂、 喷雾剂、 滴剂、 贴剂、 打针液等临床或药学上可承受的经常使用剂型。 0022 树脂预处置办法 ： 将树脂浸泡在水中12天， 使充实收缩， 装入层析柱， 先用树脂 柱体积 10 倍量的 2mol/L 盐酸以 3ml/min 流速停止交流， 使其变成氢型， 再用水洗至流出液 呈中性， 接着用树脂柱体积 10 倍量的 1mol/L 氢氧化钠溶液停止交流， 使其规复钠型， 然后 再用水洗至流出液呈中性， 接着再用树脂柱体积10倍量的1mol/L盐酸停止交流， 使其变成 氢型， 。

　　比较品纯度查抄：含量为99.07％，契合含量测定请求，计较时按100％计较。 线性干系考查：回归方程为：LnA＝1.58LnC+13.84，r＝0.9992。表白盐酸水苏碱进样 量在0.4004～4.004μg范畴外线性干系优良。精细度实验：均匀值为3245634，RSD 为0.52％，表白精细度较好。不变性实验：表白供试品溶液在72h内不变性较好。 反复性实验：均匀值为19.58mg/袋，RSD为0.97％，表白办法反复性较好。加样回 收率实验：均匀收受接管率为99.82％，RSD为1.00％，表白办法收受接管率较好。

　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　色谱前提与体系合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (6∶94)为活动相；流速为每分钟0.5ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：90℃， 氛围流速：2.8L/min)。

　　色谱前提与体系合用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (4∶96)为活动相；流速为每分钟0.4ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：80 ℃，氛围流速：2.4L/min)。

　　线性干系考查：得回归方程为：LnA＝1.58LnC+13.84，r＝0.9992。表白盐酸水苏 碱进样量在0.4004～4.004μg范畴外线性干系优良，可用外标两点法对数方程停止测 定和计较。精细度实验：反复进样5次，盐酸水苏碱峰面积的相对尺度偏向为0.52％， 表白精细度较好。不变性实验：比较品溶液计较相对尺度偏向，均匀值为899675， RSD为1.69％，表白比较品溶液在71h内不变性较好；供试品溶液计较相对尺度偏 差，日内差均匀值为260766，RSD为1.18％，白天差均匀值为2590279，RSD为1.22％， 表白供试品溶液在95h内不变性较好。反复性实验：计较盐酸水苏碱的含量均匀值 为0.978％，相对尺度偏向RSD为1.56％，表白办法反复性较好。加样收受接管率实验： 均匀收受接管率为103.67％，RSD为1.68％。

　　24、 烧杯 中， 加热水15ml使消融， 用稀盐酸调pH值至13， 经由过程已处置好的强酸性阳离子交流树脂 柱(内径1.5cm， 柱高5cm)， 用水200ml洗脱， 弃去水液， 再用甲醇-氨水(7030)100ml洗 脱， 搜集洗脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加活动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即得。 0046 阳性样品溶液的制备阳性样品溶液是按处方比例称取除益母草外其他辅料， 按制 法制成益母草阳性样品， 再取此阳性样品按上述 “供试品溶液的制备” 办法制备不含益母草 的阳性样品溶液。 0047 实验前提色谱柱 ： 十八烷基硅烷键合硅胶。

　　考查了甲醇-水和乙腈-水等差别的活动比拟例及差别的活动相流速，成果活动 相为乙腈-水(1-10∶99-90)或甲醇-水(2-12∶98-88)，流速为每1分钟0.1ml至1ml， 盐酸水苏碱均能别离；以活动相为乙腈-水(2-8∶98-92)或甲醇-水(4-8∶96-92)， 流速为每1分钟0.2ml至0.8ml，结果更优。

　　树脂预处置办法：将树脂浸泡在水中1～2天，使充实收缩，装入层析柱，先用 树脂柱体积10倍量的2mol/L盐酸以3ml/min流速停止交流，使其变成氢型，再用 水洗至流出液呈中性，接着用树脂柱体积10倍量的1mol/L氢氧化钠溶液停止交流， 使其规复钠型，然后再用水洗至流出液呈中性，接着再用树脂柱体积10倍量的 1mol/L盐酸停止交流，使其变成氢型，最初用水洗至流出液呈中性。

　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　6、， 经由过程已处置好内径 1 2cm， 柱 高 5 10cm 的强酸性阳离子交流树脂柱， 用水 50 400ml 洗脱， 弃去水液， 再用 70 30 的甲醇 - 氨水 50 400ml 洗脱， 搜集洗脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶 中， 加活动相至刻度， 摇匀， 用 0.45m 微孔滤膜滤过， 即得 ； 测定法 别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20l， 供试品溶液520l， 注 入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得综合锻炼健身器。 权 利 要 求 书 CN 101474249 B1/8 页 3 益母草及其制剂的质量检测办法 创造范畴 0001 本创造触及。

　　11、CN 101474249 B2/8 页 4 0012 活动相的流速为每分钟 0.1-1ml ； 蒸发光散射检测器检测的漂移管温度 ： 60-130， 氛围流速 ： 1.5-3.2L/min。 0013 益母草制剂的含量测定办法以下 ： 0014 色谱前提与体系合用性实验以十八烷基或辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以 1-10 99-90 的乙腈 - 水或 2-12 98-88 的甲醇 - 水为活动相 ； 蒸发光散射检测器检测。 0015 比较品溶液的制备取枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 精细称定， 加活动相 制成每 1ml 别离含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得。 0016 。

　　2、 .HPLC 法测定杜仲降压片中水苏碱 的含量 .齐鲁药事 .2006,( 第 05 期 ), 冯旭等 .HPLC-ELSD 测定益母颗粒中盐酸水 苏碱的含量. 中成药 .2008,第30卷(第5期), 附件 2. 余琪等 .益母草中盐酸水苏碱的 HPLC 测 定 .中国医药产业杂志 .2006, 第 37 卷 ( 第 1 期 ),34-35. (54) 创造称号 益母草及其制剂的质量检测办法 (57) 择要 本创造公然一种益母草及其制剂的质量掌握 办法， 是接纳高效液相色谱 - 蒸发光散射测定法， 此办法精细度、 不变性、 重现性优良， 可以有用地 掌握益母草及其制剂的产物格量。 (51)I。

　　33、脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)50ml 洗脱， 搜集洗脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加活动 相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即得。 0073 测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 0074 施行例 4 益母草胶囊含量测定办法 0075 色谱前提与体系合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (2 98) 为活动相 ； 流速为每分钟 0.2ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 。

　　45、品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 加活动相 制成每 1ml 别离含 0.05mg、 0.2mg 的溶液， 即得。 0107 供试品溶液的制备取益母草粉末 1g， 置具塞锥形瓶中， 参加乙醇 50ml， 密塞， 称定 重量， 加热回流 3 小时， 放冷， 再称定重量， 加乙醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过。量取续滤液 20ml， 水浴蒸干， 残渣加活动相使消融， 转移至10ml量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用0.45m的 微孔滤膜滤过， 即得。 0108 测定法别离汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注 入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 说 明 书 CN 101474249 B1/3 页 11 附图 1 氨基柱， 紫外检测器测定图谱 说 明 书 附 图 CN 101474249 B2/3 页 12 附图 2 氨基柱， 蒸发光散射检测器测定图谱 说 明 书 附 图 CN 101474249 B3/3 页 13 附图 3 十八烷基硅烷键合硅胶柱， 蒸发光散射检测器测定图谱 说 明 书 附 图 。

　　17、SD2000ES 蒸发光散射检测器 ； 梅特勒 - 托利多 AB265-S 电子天平。 0030 试药 ： 盐酸水苏碱化学比较品 ( 含量测定用， 批号 ： 11， 中国药品生物 成品检定所 )， 纯度经查抄契合含量测定用化学比较品的手艺请求， 含量为 99.15 ； 乙腈 ( 色谱纯 )， 水 ( 便宜双蒸水 )， 乙醇 ( 阐发纯 )。 0031 样品 ： 益母草 ( 批号 ： 080701)。 0032 比较品溶液的制备精细称取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品 19.85mg， 置 10ml 量瓶中， 加活动相使消融并稀释至刻度， 摇匀 (1.985mg/ml。

　　32、 - 水 (8 92) 为活动相 ； 流速为每分钟 0.1ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 70， 空 气流速 ： 1.8L/min。 0071 比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 精细称 定， 加活动相制成每 1ml 别离含 0.1mg、 0.2mg 的溶液， 即得。 0072 供试品溶液的制备取益母草片， 撤除包衣， 研细， 混匀， 取 0.2g， 精细称定， 置 100ml 烧杯中， 加热水 10ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3， 经由过程已处置好的强酸性 阳离子交流树脂柱 ( 内径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 100ml 洗。

　　色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水(8∶ 92)为活动相；流速为每分钟0.1ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：70℃， 氛围流速：1.8L/min。

　　比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，精细 称定，加活动相制成每1ml别离含0.04mg、0.08mg的溶液，即得。

　　仪器：日本岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪，威玛龙色谱事情站；美国奥泰ELSD 2000ES蒸发光散射检测器；梅特勒-托利多AB265-S电子天平。

　　色谱前提与体系合用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (1∶99)为活动相；流速为每分钟1ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：130 ℃，氛围流速：3.2L/min)。

　　供试品溶液的制备取益母草胶囊内容物，研细，混匀，取0.2g，精细称定， 置100ml烧杯中，加热水10ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好的 强酸性阳离子交流树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脱，弃去水液，再 用甲醇-氨水(70∶30)80ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移 至10ml量瓶中，加活动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　19、ilent ZORBAX SB-Aq 5m4.6250mm ； 活动相 ： 乙腈 - 水 (5 95)， 流速 ： 0.3ml/min ； 漂移管温度 ： 75， 氛围流 速 ： 2.2L/min ； 柱温 ： 室温。 0035 别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 10l， 注入液相 色谱仪。此前提下盐酸水苏碱与别的组分到达基线， 实际塔板数按盐 酸水苏碱计较大于 10000， 盐酸水苏碱保存工夫约为 10 分钟， 见表 1。 0036 表 1 实际塔板数、 别离度、 保存工夫数据 0037 0038 考查了甲醇 - 水和乙腈 - 水等差别的。

　　供试品溶液的制备取益母草制剂内容物，研细，混匀，精细称取或量取适当， 置100ml烧杯中，加热水10-50ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置 好的强酸性阳离子交流树脂柱，用水50～400ml洗脱，弃去水液，再用70∶30的甲 醇-氨水50～400ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移至10ml 量瓶中，加活动相至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

　　本创造中所述的益母草制剂是指益母草作为质料药或质料药之一，根据现有的 制备办法制成的制剂，包罗片剂，胶囊剂，颗粒剂，滴丸剂，口服液，煎膏剂、口 含片、丸剂、散剂、栓剂、喷雾剂、滴剂、贴剂、打针液等临床或药学上可承受的 经常使用剂型。

　　色谱前提与体系合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以甲醇-水 (6∶94)为活动相；流速为每分钟0.3ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：95 ℃，氛围流速：2.6L/min)。

　　42、交流树脂柱(内径1cm， 柱高 5cm)， 用水 50ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)50 200ml 洗脱， 搜集洗 脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加活动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即得。 0098 测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 0099 施行例 9 益母草打针液含量测定办法 0100 色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以甲醇 - 水 (3 97) 为活动相 ； 流。

　　12、供试品溶液的制备取益母草制剂内容物， 研细， 混匀， 精细称取或量取适当， 置 100ml烧杯中， 加热水10-50ml使消融， 用稀盐酸调pH值至13， 经由过程已处置好的强酸性阳 离子交流树脂柱， 用水 50 400ml 洗脱， 弃去水液， 再用 70 30 的甲醇 - 氨水 50 400ml 洗脱， 搜集洗脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加活动相至刻度， 摇 匀， 用 0.45m 的微孔滤膜滤过， 即得。 0017 测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 。

　　阳性样品溶液的制备阳性样品溶液是按处方比例称取除益母草外其他辅料， 按制法制成益母草阳性样品，再取此阳性样品按上述“供试品溶液的制备”办法制 备不含益母草的阳性样品溶液。

　　测定法别离汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注 入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　供试品溶液的制备取益母草粉末(过三号筛)约0.5g，精细称定，置具塞锥 形瓶中，精细参加乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定 重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精细量取续滤液20ml，水浴蒸干，残 渣加活动相使消融，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm) 滤过，即得。

　　供试品溶液的制备取益母草粉末0.2-1g，置具塞锥形瓶中，参加乙醇50ml， 密塞，称定重量，加热回流0.5-3小时，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量， 摇匀，滤过。量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加活动相使消融，转移至10ml量 瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

　　供试品溶液的制备取益母草膏，混匀，取1.5g，精细称定，置100ml烧杯中， 加热水30ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好的强酸性阳离子交流 树脂柱(内径1.5cm，柱高6cm)，用水150ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30) 100ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移至10ml量瓶中，加流 动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　比较品溶液的制备取枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，加活动相制成每 1ml别离含0.05mg、0.15mg的溶液，即得。

　　34、95， 空 气流速 ： 1.9L/min)。 0076 比较品溶液的制备取盐酸水苏碱比较品适当， 精细称定， 加活动相制成每 1ml 分 别含 0.03mg、 0.15mg 的溶液， 即得。 0077 供试品溶液的制备取益母草胶囊内容物， 研细， 混匀， 取 0.2g， 精细称定， 置 100ml 烧杯中， 加热水10ml使消融， 用稀盐酸调pH值至13， 经由过程已处置好的强酸性阳离子交流 树脂柱 ( 内径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 100ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)80ml 洗脱， 搜集洗脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 。

　　43、速为每分钟 0.8ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 120， 空 气流速 ： 3L/min)。 0101 比较品溶液的制备取 105枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 精细称定， 加流 动相制成每 1ml 别离含 0.05mg、 0.1mg 的溶液， 即得。 0102 供试品溶液的制备取益母草打针液， 混匀， 精细量取 0.5ml， 置 100ml 烧杯中， 加 水 10ml 稀释， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3， 经由过程已处置好的强酸性阳离子交流树脂柱 ( 内径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 50ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)50ml 洗脱。

　　10、 加活动相制成每 1ml 别离含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得。 0010 供试品溶液的制备取益母草粉末 0.2-1g， 置具塞锥形瓶中， 参加乙醇 50ml， 密塞， 称定重量， 加热回流 0.5-3 小时， 放冷， 再称定重量， 加乙醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过。量 取续滤液 20ml综合锻炼健身器， 水浴蒸干， 残渣加活动相使消融， 转移至 10ml 量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用 0.45m 的微孔滤膜滤过， 即得。 0011 测定法别离汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注 入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 说 明 书 。

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　　本创造公然一种益母草及其制剂的质量掌握办法，是接纳高效液相色谱-蒸发光散射测定法，此办法精细度、不变性、重现性优良，可以有用地掌握益母草及其制剂的产物格量。

　　比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，精细 称定，加活动相制成每1ml别离含0.08mg、0.16mg的溶液，即得。

　　3、nt.Cl. (56)比照文件 检查员 周静 (19)中华群众共和国国度常识产权局 (12)创造专利 权益请求书 1 页 仿单 8 页 附图 3 页 CN 101474249 B1/1 页 2 1. 一种益母草及含益母草制剂的含量测定办法， 其特性在于， 含量测定的步调包罗如 下 ： 益母草的含量测定办法 ： 色谱前提与体系合用性实验 ： 以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以 2-12 98-88 的甲 醇 - 水为活动相 ； 流速为每分钟 0.1-1ml ； 蒸发光散射检测器检测， 漂移管温度 ： 60-130， 氛围流速 ： 1.5-3.2L/min ； 比较品溶液的制备 取枯燥至恒重的。

　　比较品溶液的制备取105℃枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，精细称定， 加活动相制成每1ml别离含0.7mg、0.14mg的溶液，即得。

　　试药：盐酸水苏碱化学比较品(含量测定用，批号：11，中国药品 生物成品检定所)，纯度经查抄契合含量测定用化学比较品的手艺请求，含量为 99.15％；乙腈(色谱纯)，水(便宜双蒸水)，乙醇(阐发纯)。

　　供试品溶液的制备取益母草片，撤除包衣，研细，混匀，取0.2g，精细称定， 置100ml烧杯中，加热水10ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好的 强酸性阳离子交流树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脱，弃去水液，再 用甲醇-氨水(70∶30)50ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移 至10ml量瓶中，加活动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　4、盐酸水苏碱比较品适当， 加活动相制成每 1ml 分 别含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得 ； 供试品溶液的制备 取益母草粉末 0.2-1g， 置具塞锥形瓶中， 参加乙醇 50ml， 密塞， 称 定重量， 加热回流 0.5-3 小时， 放冷， 再称定重量， 加乙醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过 ； 量 取续滤液 20ml， 水浴蒸干， 残渣加活动相使消融， 转移至 10ml 量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用 0.45m 的微孔滤膜滤过， 即得 ； 测定法 别离汲取上述两种浓度的比较品溶液各20l， 供试品溶液520l， 注入液 相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得 ；。

　　9、 本创造另外一目标在于供给一种益 母草制剂含量测定办法。 0005 益母草的含量测定办法以下 ： 0006 益母草的含量测定办法使用高效液相色谱 - 蒸发光散射测定法 (HPLC-ELSD)。 0007 高效液相色谱 - 蒸发光散射测定法包罗色谱前提与体系合用性实验， 比较品溶液 的制备， 供试品溶液的制备和盐酸水苏碱的含量测定步调。 0008 色谱前提与体系合用性实验 ： 以十八烷基或辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以 1-10 99-90 的乙腈 - 水或 2-12 98-88 的甲醇 - 水为活动相 ； 蒸发光散射检测器检测。 0009 比较品溶液的制备取枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，。

　　比较品溶液的制备精细称取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品 19.85mg，置10ml量瓶中，加活动相使消融并稀释至刻度，摇匀(1.985mg/ml)；精 密量取0.6ml、2ml别离置25ml量瓶，加活动相至刻度，摇匀，即得(47.64μg/ml、 158.8μg/ml)。

　　比较品溶液的制备精细称取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品 10.01mg，置10ml量瓶中，加活动相使消融并稀释至刻度，摇匀(1.001mg/ml)；精 密量取0.5ml、1.5ml别离置10ml量瓶，加活动相至刻度，摇匀，即得(50.05μg/ml、 150.15μg/ml)。

　　测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计较，即得。

　　本创造与公然的办法停止了比照：比照办法1)用高效液相色谱法测定益母草 颗粒中的盐酸水苏碱含量，接纳氨基柱或磺基柱、紫外检测器检测，选用的波长为 紫外结尾吸取，基线不不变，滋扰严峻，且氨基柱或磺基柱易水解，使柱效低落， 影响别离结果，见附图1；比照办法2)用氨基柱、蒸发光散射检测器对盐酸水苏碱 含量停止测定，但氨基柱易水解，招致尝试过程当中基线。本发 明的办法选用不变性好的十八烷基硅烷键合硅胶反相色谱柱，接纳HPLC-ELSD法对 益母草及其制剂中的盐酸水苏碱停止含量测定研讨，成果基线不变，别离度好，见 附图3。办法学考证表白，该法别离结果优良，办法线性、不变性、反复性、加样 收受接管率等办法学考查均契合定量测定的请求。

　　供试品溶液的制备取益母草粉末0.2g，置具塞锥形瓶中，参加乙醇50ml，密 塞，称定重量，加热回流0.5小时，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量， 摇匀，滤过。量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加活动相使消融，转移至10ml量 瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

　　22、为 103.67， RSD 为 1.68。 0040 施行例 2 ： 益母草颗粒含量测定 0041 仪器 ： 日本岛津 LC-10Atvp 高效液相色谱仪， 威玛龙色谱事情站 ； 美国奥泰 ELSD2000ES 蒸发光散射检测器 ； 梅特勒 - 托利多 AB265-S 电子天平。 0042 试药 ： 盐酸水苏碱化学比较品 ( 含量测定用， 批号 ： 11， 中国药品生物 成品检定所 )， 纯度经查抄契合含量测定用化学比较品的手艺请求， 含量为 99.07 ； 甲醇 ( 色谱纯 )， 乙腈 ( 色谱纯 )， 水 ( 便宜双蒸水 )， 氨水 ( 阐发纯 )， 732 型强酸性。

　　供试品溶液的制备取益母草口服液，混匀，精细量取2ml，置100ml烧杯中， 加热水15ml稀释，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好的强酸性阳离子交流树 脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水50ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30) 50～200ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移至10ml量瓶中， 加活动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　25、色谱柱 Agilent ZORBAX SB-Aq5m 4.6250mm色谱柱 ； 活动相 ： 乙腈-水(595)， 流速 ： 0.3ml/min ； 漂移管温度 ： 75， 氛围 流速 ： 2.2L/min ； 柱温 ： 室温。 0048 别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液及不含益母草的 阳性样品溶液各 20l， 注入液相色谱仪。此前提下盐酸水苏碱与别的组分到达基线， 实际塔板数按盐酸水苏碱计较大于 10000， 盐酸水苏碱保存工夫约为 10 分 钟， 见表 2。阳性样品溶液在色谱在响应地位无吸取峰， 可见阳性无滋扰。 0049 表 2 实际。

　　37、过， 即得。 0083 测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 0084 施行例 6 益母草膏含量测定办法 0085 色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以甲醇 - 水 (10 90) 为活动相 ； 流速为每分钟 0.2ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 110， 氛围流速 ： 3.0L/min)。 0086 比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 精细称 定， 加活动相制成每 1ml 别离含 0.03mg、 0.18mg 的溶液。

　　13、0018 活动相的流速为每分钟 0.1-1ml ； 蒸发光散射检测器检测的漂移管温度 ： 60-130， 氛围流速 ： 1.5-3.2L/min。 0019 强酸性阳离子交流树脂柱的内径 1 2cm， 柱高 5 10cm。 0020 制剂的取样量为 ： 益母草颗粒取 0.1-2g， 益母草片及胶囊取 0.05-0.5g， 益母草 流浸膏取 2-10g， 益母草膏取 0.2-1.5g， 益母草口服液量取 0.5-5ml， 益母草打针液量取 0.1-1ml， 其他益母草制剂取样量按含益母草生药量 0.1-4g 而定取样量。 0021 本创造中所述的益母草制剂是指益母草作为质料药或质料药之一， 根据。

　　仪器：日本岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪，威玛龙色谱事情站；美国奥泰ELSD 2000ES蒸发光散射检测器；梅特勒-托利多AB265-S电子天平。

　　29、.05mg、 0.2mg 的溶液， 即得。 0062 供试品溶液的制备取益母草粉末 0.2g， 置具塞锥形瓶中， 参加乙醇 50ml， 密塞， 称定重量， 加热回流 0.5 小时， 放冷， 再称定重量， 加乙醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过。量 取续滤液 20ml， 水浴蒸干， 残渣加活动相使消融， 转移至 10ml 量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用 0.45m 的微孔滤膜滤过， 即得。 0063 测定法别离汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注 入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 0064 施行例 2 益母草颗粒含量测定办法 0065 色。

　　活动相的流速为每分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测的漂移管温度：60-130 ℃，氛围流速：1.5-3.2L/min。

　　44、， 搜集洗 脱液， 蒸干， 残渣加活动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加活动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即得。 0103 测定法别离精细汲取上述两种浓度的比较品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计较， 即得。 0104 施行例 10 益母草药材含量测定办法 0105 色谱前提与体系合用性实验 ： 以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (1 99) 为活动相 ； 流速为每分钟 1ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 130， 氛围 流速 ： 3.2L/min)。 0106 比较。

　　益母草，别号茺蔚、坤草，是一种草本动物。性微寒，味苦辛，可去瘀生新， 活血调经，利尿消肿，是历代医家用来医治妇科病之要药。当代医学研讨证实， 益母草含益母草碱、盐酸水苏碱、益母草定、益母草宁等多种生物碱及苯甲酸、氯 化钾等。据当代临床及植物施行证实，益母草浸膏及煎剂对子宫有强而耐久的镇静 感化，不单能加强其膨胀力，同时能进步其慌张度和膨胀率。

　　5、 益母草制剂的含量测定办法 ： 色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以 2-12 98-88 的甲 醇 - 水为活动相 ； 流速为每分钟 0.1-1ml ； 蒸发光散射检测器检测， 漂移管温度 ： 60-130， 氛围流速 ： 1.5-3.2L/min ； 比较品溶液的制备 取枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当， 精细称定， 加活动相制成 每 1ml 别离含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得 ； 供试品溶液的制备 取益母草制剂内容物， 研细， 混匀， 精细称取或量取适当， 置 100ml 烧杯中， 加热水 10-50ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3。

　　比较品溶液的制备取五氧化二磷枯燥至恒重的盐酸水苏碱比较品适当，精细 称定，加活动相制成每1ml别离含0.03mg、0.18mg的溶液，即得。

　　色谱前提与体系合用性实验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以甲醇-水 (10∶90)为活动相；流速为每分钟0.2ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度： 110℃，氛围流速：3.0L/min)。

　　26、塔板数、 别离度、 保存工夫数据 0050 0051 考查了甲醇 - 水和乙腈 - 水等差别的活动比拟例及差别的活动相流速， 成果活动 相为乙腈 - 水 (1-10 99-90) 或甲醇 - 水 (2-12 98-88)， 流速为每 1 分钟 0.1ml 至 1ml， 盐酸水苏碱均能别离 ； 以活动相为乙腈 - 水 (2-8 98-92) 或甲醇 - 水 (4-8 96-92)， 流 说 明 书 CN 101474249 B5/8 页 7 速为每 1 分钟 0.2ml 至 0.8ml， 结果更优。 0052 比较品纯度查抄 ： 含量为 99.07， 契合含量测定请求， 计较时按 100计较。线、 性干系考查 ： 回归方程为 ： LnA 1.58LnC+13.84， r 0.9992。表白盐酸水苏碱进样量在 0.4004 4.004g 范畴外线性干系优良。精细度实验 ： 均匀值为 3245634， RSD 为 0.52， 表白精细度较好。不变性实验 ： 表白供试品溶液在 72h 内不变性较好。反复性实验 ： 均匀 值为 19.58mg/ 袋， RSD 为 0.97， 表白办法反复性较好。加样收受接管率实验 ： 均匀收受接管率为 99.82， RSD 为 1.00， 表白办法收受接管率较好。 0053 施行例 3 ： 益母草制剂含量测定 0054 按手艺计划中益母草制剂的含量测定项下依法测定各制剂样。

　　色谱前提与体系合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (7∶93)为活动相；流速为每分钟0.2ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：90 ℃，氛围流速：2.8L/min)。

　　色谱前提与体系合用性实验以十八烷基或辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以 1-10∶99-90的乙腈-水或2-12∶98-88的甲醇-水为活动相；蒸发光散射检测器检测。

　　样品：益母草颗粒(批号：1508001)及缺益母草药材的阳性对还是品，广西灵 峰药业有限公司。

　　供试品溶液的制备取益母草打针液，混匀，精细量取0.5ml，置100ml烧杯中， 加水10ml稀释，用稀盐酸调pH值至1～3，经由过程已处置好的强酸性阳离子交流树脂 柱(内径1cm，柱高5cm)，用水50ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30) 50ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加活动相消融，并转移至10ml量瓶中，加流 动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　比较品溶液的制备取盐酸水苏碱比较品适当，精细称定，加活动相制成每1ml 别离含0.03mg、0.15mg的溶液，即得。

　　按手艺计划中益母草制剂的含量测定项下依法测定各制剂样品，之外标两点法 对数方程计较样品中盐酸水苏碱的含量，成果见表3。